貨號：10414-1， 包裝：50T，價(jià)格：300元
英文名稱：TCA Protein Precipitation Kit
TCA蛋白濃縮試劑盒
TCA Protein Precipitation Kit
產(chǎn)品組分(50T)；
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 保存溫度 |
試劑A--沉淀劑 | 10ml | RT |
試劑B--洗滌液 | 30ml | RT |
試劑C--助沉淀劑 | 5ml | RT |
試劑D--中和液 | 250ul | RT |
1M NaCI | 1ml | RT |
5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性，還原） | 1ML | -20℃ |
40mM 碳酸鈉 | 1ml | RT |
產(chǎn)品簡介：
試劑盒原理：在酸性條件下，三氯醋酸（Trichloroacetic acid，TCA）與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽，使蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致構(gòu)象發(fā)生改變，蛋白暴露出較多的疏水性基團(tuán)，蛋白發(fā)生聚集而沉淀。為了避免TCA對后續(xù)電泳的影響，沉淀的蛋白要使用洗滌液徹底清洗去除TCA。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白樣品處理。
操作方法：
1---準(zhǔn)備1.5ml干凈的離心管，加入800ul蛋白樣品溶液。
可選：如果樣品溶液中離子強(qiáng)度低于10mM,補(bǔ)加8ul的1M NaCI溶液。若低于800ul的樣品，加入8ul 1M NaCI,用水補(bǔ)齊體積至800ul，使NaCI終濃度為10mM.
2---加入80ul試劑C-助沉淀劑，混勻，常溫靜置15min。
3---加入步驟2溶液1/8體積的試劑A -110 μl，補(bǔ)加1/8體積水110ul，渦旋震蕩10-30秒，使之充分混勻。
4--冰浴放置15min。
5--4℃，12000 rpm（13000 g）離心10 分鐘。 注：離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。
6--小心去掉上清液，保留沉淀。
注：請小心操作，可以用移液器輔助徹底吸棄上清。
7--沉淀中加入600 μl試劑B，渦旋震蕩10-30秒，徹底混勻。
注：試劑B有刺激性氣味，請?jiān)谕L(fēng)櫥內(nèi)操作。
8--冰浴15min。
9--4℃，12000 rpm（13000 g) 離心10分鐘；在通風(fēng)櫥中，倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄，沉淀物通風(fēng)晾干30-60秒。注：沉淀不能過分干燥，否則將導(dǎo)致蛋白不好溶解。
10--蛋白溶解：
根據(jù)下表選擇溶解緩沖液
下游實(shí)驗(yàn) | 溶解緩沖液 |
SDS-PAGE電泳 | 1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性，還原）。 注：加入溶解緩沖液后，徹底溶解沉淀（37℃溫浴處理），溶液正常顏色應(yīng)為藍(lán)色；如果溶液為淡綠色或黃色，加入1/10體積中和液D，使顏色變回藍(lán)色。 95℃ 處理5分鐘，電泳上樣 |
BCA蛋白定量 | 40mM 碳酸鈉pH11.25 |
等電聚焦IEF/2D電泳 | 7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4 |
酶切實(shí)驗(yàn) | 100 mM碳酸氫銨 pH8.5 |
保存溫度：
試劑盒常溫運(yùn)輸；收到后，按照標(biāo)簽溫度貯存；本試劑盒有效期1年