貨號：10201-1， 包裝：50ML，價格：90元
貨號：10201-2， 包裝：100ML，價格：150元
產(chǎn)品別名：RIPA(強)裂解液(帶有抑制劑)
英文名稱：RIPA Lysis Buffer
英文別名：RIPA Lysis Buffer
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等
試劑盒組分：
RIPA裂解液（10201） 100ML | 1瓶(2-8℃) |
磷酸酶抑制劑（10312） 1ML | 1支（-20℃） |
100mM PMSF (10207) 1ML | 1支（-20℃） |
使用說明：
培養(yǎng)細胞樣品：
a.融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，或者根據(jù)實驗需要加入適當(dāng)?shù)纳鲜龅鞍酌噶姿崦敢种苿┗旌衔铩?/span>
b.對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。植物細胞宜在冰上裂解2-10min。
C.對于懸浮細胞：離心收集細胞，輕輕vortex或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。輕彈管底以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
d.對于細菌或酵母：對于1ml菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用PBS洗滌一次，充分去除液體后，輕輕vortex或者彈擊管底以把細菌或酵母盡量彈散。加入100-200微升裂解液，輕輕vortex或者彈擊管底以混勻，冰上裂解2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果，細菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后在使用本裂解液進行裂解。
e.對于組織樣品：用組織剪將組織剪成碎片后，按照每 20mg 組織加入 150-250μL 裂解 液的比例加入裂解液，并使用用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。如果用于 ChIP，初步裂 解后需在冰浴上繼續(xù)裂解 10 分鐘；
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞或者1ml的菌液或酵母液中的細菌和酵母量加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100萬動物細胞用100微升本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2-4mg/ml，不同細胞有所不同。
f.充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
儲存：2-8°C
包裝：100ml